ТЕМЕ

Хроматографија на колони

Хроматографија на колони


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.


Ето хроматографија (из грчког χρωμα, транслитерован ин кхрома, „боја“), је техника за одвајање компонената хомогене смеше заснована на расподели њених компонената између две фазе, једне непокретне и оне која се креће дуж одређеног смера. Ухроматографија на колониправац иде од врха до дна и диктира га стаклена цев (колона).

Ето хроматографија на колони је посебна хроматографска техника заснована на својству да неке супстанце једном растворене у погодним растворима ступе у интеракцију са одговарајуће припремљеном чврстом матрицом. Покушаћу боље да објасним шта значи оно што сам управо написао!

Хроматографија на колони: шта је то

Није ништа друго до хроматографска метода раздвајања која се одвија у стакленој колони. Ова техника користи разлику у наелектрисању, величини, афинитету везе или другим својствима компоненте која се изолује да би се створиле траке са различитим карактеристикама.

На фотографијама на овој страници приказујемо вам редоследхроматографија на колониа посебно екстракција елуата, то јест „делимично пречишћене“ супстанце која излази из крајње млазнице стаклене колоне.

Етохроматографија на колонивеома је корисно за пречишћавање протеина и за одвајање великог броја супстанци које треба испитати појединачно. Понекад супстанце изоловане сахроматографија на колони губе својства која су имали унутар смеше. Све зависи од техникехроматографија на колонии од супстанце коју желите да пречистите.

Хроматографија на колони: како то функционише

Стаклена цев је испуњена порозним чврстим материјалом, дефинисаним као „стационарна фаза". Стационарна фаза има одговарајућа хемијска својства изабрана на основу супстанце која се пречишћава / одваја од смеше. Колона се затим пуни пуферским раствором, такође одговарајуће формулисаном. Решење пуфера назива се "Мобилна фаза”И садржи смешу коју желите да раздвојите.

Смеша која се одваја раствара се уМобилна фаза. Тада долази мобилна фазаслојевитана врхуколонаи процијеђена крозстационарна фаза(чврста матрица). На овај начин, решење се шири дужколонаи формира континуирани појас дуж целе стационарне фазе. Супстанце које елуирају (напуштају) колону имају специфична својства заснована на редоследу избегавања.

Да бисмо боље разумели, узмимо пример пречишћавања протеина, чак и ако мобилна фаза може бити представљена било којом смешом. Имаћемо појединачне протеине који се елуирају из колона мање или више брзо према њиховим својствима.

Према типу стационарне фазе, имамо различите техникехроматографија на колони, Која:

  • Хроматографија са јонском разменом
  • Хроматографија молекуларне искључења
  • Афинитетна хроматографија

Постоји и скупља техника која користи високи притисак, наиметечна хроматографија високог притискаили ХПЛЦ.

Хроматографија са јонском разменом

У јоноизмењивачка хроматографијачврста матрица (стационарна фаза) богата је позитивним или негативним наелектрисањима. Подразумева се да јејоноизмењивачка хроматографијаискориштава разлике у врсти и интензитетунето електрични набојпри одређеном пХ.

У овом случају,стационарна фазаје синтетички полимер (смола) који садржи негативно наелектрисане групе (отуда и говоримо о томекатионски измењивачи) или позитивно наелектрисане групе (говоримо оанион сцаберс).

Враћајући се на пример пречишћавања протеина, разлика у наелектрисаности је повезана са присуством аминокиселина са одређеним функционалним групама. Афинитет сваког протеина за наелектрисане групе одколонато зависи од пХ који заузврат утиче на стање јонизације функционалних група саставних аминокиселина.

Ухроматографија на колонирешење које се припрема за мобилну фазу је критично. У нашем примеру са протеинима, концентрација соли и пХ могу створити градијент који може фаворизовати екструзију одређених протеина.

Јонска хроматографија: размена катјона

У случају јонска хроматографијаса матрицом катион-размене, чврста матрица има негативно наелектрисане групе, па ће протеини са нето позитивним наелектрисањем последњи потећи из колоне. Прва једињења која су изашла изколонато ће бити они са јаким нето негативним наелектрисањем (одбијањем од матрице), тада ће изаћи супстанце са делимичним негативним наелектрисањем. Супстанце које се елуирају кретаће се крозколонаса брзином која зависи од њиховог нето пуњења у коришћеном раствору.

Хроматографија молекуларне искључења

У овом случају, смеша (мобилна фаза) се додаје у једномколонакоји садрже аполимерса унакрсним везама и молекулима изизоловатиони ће бити одвојени по величини. Инстинктивно се мисли да ће најмањи молекули прво изаћи из колоне, али у стварности је управо супротно.

Већи молекули биће приморани да пређу најкраћи пут до краја колоне. Дифузијом ће мањи молекули моћи слободно да продру кроз поре чврсте матрице, што ће потрајати дуже да би се елуирали. Први прикупљени елуат биће онај који садржи највеће молекуле.

Афинитетна хроматографија на колони

Лиганд је присутан у стационарној фази. Како раствор који се раздваја прелази колону, молекули који имају афинитет за тај лиганд формираће специфичну везу. Супстанце од интереса ће се задржати у првој или последњој фракцији прикупљеној на основу врсте употребљеног лиганда.

Течна хроматографија под високим притиском

Техникехроматографија на колониуправо описани могу имати дискретну резолуцију опсега. Разлог? Свака супстанца тежи да се дифундира након одређеног времена.

Коришћењем пумпи високог притиска брзина се повећава, а време које молекули путују колоном се смањује. У том контексту потребне су хроматографске матрице способне да поднесу јаке притиске.

Смањивањем времена проласка кроз колону,течна хроматографија високог притиска(ХПЛЦ) ограничава ширење трака и знатно побољшава резолуцију сакупљеног елуата.